2019年5月31日-6月4日，第55届ASCO年会继续相聚芝加哥，今年会议主题是:

　　ASCO会议内容有许多关于液体活检的研究进展，今天我们通过ASCO会议来看看循环肿瘤细胞CTCs在免疫治疗和肿瘤免疫学中的相关报道。

 

1 PD-L1 expression on circulating tumor cells and prognosis of breast cancer patients.

【乳腺癌患者循环肿瘤细胞中的PD-L1表达和预后】

　　● 研究地区：中国·北京协和医学院

　　● 摘要链接：http://abstracts.asco.org/239/AbstView_239_247627.html

研究背景：目前临床上部分患者能够从PD1/PD-L1抑制剂治疗中受益，也有有针对特定乳腺癌患者的临床试验。虽然我们知道乳腺癌的预后与CTCs有关且对分子靶向治疗的预测和监督至关重要，但PD-L1在CTCs中的表达尚缺乏研究, 且对PD-L1检测点抑制剂的预测生物标志物反应缺乏。因此，本研究试图探讨乳腺癌患者CTCs中PD-L1的表达与预后及临床病理特征的关系。

研究方法：通过基因探针杂交，分析20例原发性乳腺癌患者的CTCs和PD-L1基因在CTCs上的表达。采用卡方检验分析临床病理特征与CTCs中PD-L1表达的关系。采用Kaplan-Meier和单变量Cox比例风险模型分析比较高pd-l1表达和低pd-l1表达患者的生存率。

研究结果：

　　(1)在20名患者中，15名患者在其7.5ml外周血中检测到有超过1个CTC，在这15名患者中，每名患者至少有1个CTC显示PD-L1;

　　(2)将PD-L1在CTC上的表达分为低表达、中表达和高表达，然后给出低表达1分，中等表达2分和高表达3分，PD-L1高表达总分≥3，而PD-L1低表达总分<3;我们发现CTC上的PD-L1表达与肿瘤大小 (P=0.012) 淋巴结状态(P=0.001) 和PR状态 (P=0.037) 有关，大肿瘤组T2和T3之间存在显著差异(P=0.003) ;而在淋巴结状态组中N1 vs N3 (P=0.000) 中N2 vs N3 (P=0.015) 之间存在统计学差异;

　　(3)研究数据表明，与CTC上的低PD-L1表达相比，CTC上具有高PD-L1表达的患者总体存活率较差 (P=0.004) (表) ; 单变量Cox比例风险模型分析显示, CTC上高PD-L1表达是一个独立的预后因素。

结论：CTC上的PD-L1确实与一些不良的临床病理特征相关;CTC上PD-L1的高表达是较短存活的独立预后因素，与较短的生存期相关。

 

2 Role of the expression of PD-L1 and CD47 on circulating tumor cells (CTCs) in the prediction of outcome in metastatic breast cancer (mBC) patients.

【循环肿瘤细胞 (CTCs) 上PD-L1和CD47表达在转移性乳腺癌 (mBC) 患者预后中的作用】

研究地区：希腊

摘要链接：http://abstracts.asco.org/239/AbsView_239_267255.html

研究背景：CTCs中中先天性免疫检查点 (CD47) 和适应性免疫检查点 (PD-L1) 的检测有可能协助对监测免疫逃逸。在该研究中，评估了转移性乳腺(MBC)患者CTCs中CD47和/或PD-L1表达与临床特征之间的相关性。

研究方法：对98例MBC患者在一线治疗开始前进行血液采集。进行外周血单核细胞 (PBMC) 细胞角蛋白 (CK) 、CD47和PD-L1的三重免疫荧光染色在，并使用Ariol显微镜系统分析每个患者1*106 PBMCs。用MDA.MB.231 乳腺癌细胞作为对照，对CK+CTCs的CD47和PD-L1表达水平进行标化。

研究结果：

　　(1)22.4%(22/98)的患者检测到CK+CTCs;分别在41.9%和11.6%的CTCs中鉴定出高CD47和PD-L1表达，而在9.1%的CTC中，两种标志物均观察到高表达;

　　(2)在11.2%的患者中鉴定出具有至少一种标志物高表达(CD47-高和/或PD-L1-高)的CTC，尽管在三阴性、激素受体阳性和HER2阳性的原发性肿瘤患者中具有差异分布 (分别为27.3%、12.5% 、0%, p=0.040);CD47-高和/或PD-L1-高的CTCs与疾病进展相关(27.8% vs 5.6%，p=0.005)，与较短的PFS相关【中位数5.8(4.1~7.5)vs 13.3(11.4~15.2)个月， p=0.010】，而仅检测到PD-L1-高的CTCs与OS降低相关【中位数23.8(5.8~41.8)vs 35.7(29.9~41.4)个月，p=0.043】;

　　(3)多变量Cox回归分析显示CD47-高和/或PD-L1-高CTCs预测复发风险增加【HR：2.7(95%CI：1.3~5.7); p=0.009】，而PD-L1-高CTCs与高死亡风险相关【HR：4.8(95%CI：1.4~16.6); p=0.011】。

结论：免疫检查点CD47和PD-L1在mBC患者的CTC子集中共表达;在CTC上检测到高CD47和/或PD-L1表达与三阴性肿瘤、疾病进展和患者不良结果相关，并且可用于改善mBC中的预后;携带该类CTC群体的患者可受益于抗CD47和抗PD-L1免疫治疗。

 

3 Circulating tumor cell (CTC) PD-L1 and interferon regulatory factor-1 (IRF-1) expression as biomarkers of anti-PD-(L)1 response.

【循环肿瘤细胞 (CTC) PD-L1和干扰素调节因子-1 (IRF-1) 表达作为抗PD- (L) 1应答的生物标志物】

研究地区：美国

摘要链接：http://abstracts.asco.org/239/AbstView_239_269835.html

研究背景：抗PD-L1检查点抑制剂(CPI)由于其持久的反应和耐受性显著提高了多种实体瘤患者的生存率。不幸的是，只有一小部分实体瘤患者(PTs)有客观反应。假设CTCs中的PD-L1和IRF-1表达可能与CPI反应相关，并对它们的表达进行初步评估。

研究方法：对转移性实体瘤患者行抗PD-L1单药或联合治疗。在3个时间点抽取7.5 cc的血液进行CTC评估：基线、1次CPI剂量后、开始CPI后3-6个月或停止CPI时。外周血CTC用Accuyte试剂盒分离，并进行CK/EPCAM、抗CD45、核染色、PD-L1和IRF-1染色。然后用Cytefinder软件识别CTC。

研究结果：

　　(1)已登记16例患者，患者中位年龄71岁(28~83)、中位ECOG = 1(0~3);50%是女性;其中50%为NSCLC，13%为头颈癌，13%为乳腺癌，24%为其他癌种;

　　(2)在基线时期，有13位患者血液中鉴定到了CTC(#CTCs范围在0~101)，其中12位患者自开始CPI治疗时接受影像学扫描，根据RECIST 1.1( 实体肿瘤的疗效评价标准 1.1 版 )，其中3位患者有部分反应(PR)，1位患者有稳定疾病(SD)，8位患有疾病进展(PD);具有PR的患者在基线时期的CTC上IRF-1染色更常见(表)，并且1/3的CTC PD-L1阳性;

　　(3)6例具有肿瘤组织PD-L1染色的结果可用于相关性分析，其中3例为PD-L1+(阳性定义为肿瘤组织PD-L1≥1%);肿瘤组织PD-L1+的1位患者具有PD-L1+的CTCs;在肿瘤组织PD-L1-的3位患者中，1位患者具有混合的PD-L1+/PD-L1-CTC群，而另2位CTC没有检测到PD-L1染色。

结论：CTC的分离和计数在不同实体肿瘤中都是可行的。抗PD-L1的PR患者可能具有较高的IRF-1+CTCs;不过该结果仅为初步，更多的pts和样本正在评估中。

 

4 Quantification of activated and exhausted immune cell populations and simultaneous characterization of CTCs in peripheral blood of cancer patients receiving checkpoint inhibitor therapy

【接受检查点抑制剂治疗的癌症患者外周血中活化和耗竭免疫细胞群的定量以及CTCs的表征】

研究地区：美国

摘要链接：http://abstracts.asco.org/239/AbstiView_239_269185.html

研究背景：免疫检查点抑制剂(ICIs)正成为许多肿瘤的标准治疗方案，但是有相当一部分患者对ICIs此反应不佳。单个生物标志物如PD-L1在预测患者获益方面不够准确。该研究试图扩展Epic Sciences无创液体活检平台，利用CTC分子分析和免疫细胞变化来识别ICIs的预测性外周血生物标志物。

研究方法：从接受ICIs治疗的前列腺癌、肾癌和膀胱癌患者中采集基线和治疗时的血液样本，并发送给EPIC科学。将核细胞铺在玻璃载玻片上，对CTCs进行免疫板染色(pan-ck，CD45，pd-l1和dapi)，其中活化的细胞(cd4，cd8，ki-67和dapi)，衰竭的免疫细胞(cd8，ki-67，pd-1，lag-3，tim-3和dapi)。免疫细胞和循环肿瘤细胞群的变化用高通量数字病理学进行评估。

研究结果：73%(24/33)患者中检出CTC，其中12%(4/33)患者中检出PD-L1+CTC。9个受试治疗样本中未检测到PD-L1+CTC。在14例匹配样本的患者的基线相比，在治疗样本中57%(8/14)患者的活化CD4+白细胞增加，36%(5/14)患者的活化CD8+白细胞的增加。在匹配样本的一个子集(14个样本中的6个)上进行耗尽分析。在基线和治疗样本中，一名患者的CD8+白细胞消耗量高于健康供体对照组，两名患者的CD8+白细胞消耗量低于对照组。从基线到治疗期间，未观察到耗尽的CD8+白细胞的变化。

结论：开发了一个基于液体活检的平台，可以同时测量单个外周血样本中CTC和白细胞的生物标志物。检测ICIs治疗后激活和耗尽的免疫细胞群的变化，并评估CTC上PD-L1的表达,下一步的工作是将免疫细胞和罕见细胞群分层。

5 Clinical implication of monitoring PD-L1+ circulating tumor cells (CTCs) in patients with non-small cell lung cancer (NSCLC) receiving immunotherapy.

【在接受免疫治疗的非小细胞肺癌(NSCLC)患者中监测PD-L1+循环肿瘤细胞(CTC)的临床意义】

研究地区：美国

摘要链接：http://abstracts.asco.org/239/AbstView_239_269637.html

研究背景：CTC是液体活检的细胞组成部分，对这些细胞的检测有助于鉴别残留疾病和预后不良的患者。然而，对于不同类型的CTC是否可以用来监测癌症干性(Stemness)和患者的免疫治疗反应尚不清楚。目前，用于监测CTC中癌干细胞标记物(如CD44或CD166)和免疫治疗靶点(包括PD-L1)的临床数据有限。本研究假设动态监测这些标记物的CTC阳性与NSCLC患者对免疫检查点抑制剂治疗的反应相关。

研究方法：作为外周血细胞前瞻性分析的一部分，纳入了30例接受免疫治疗(彭布罗珠单抗或阿托唑单抗)或联合化疗的NSCLC患者，每隔3-4周采集血样，最多24周。分离并分析外周血单个核细胞的CD45，鉴定非白细胞CTC的CD166和CD4，鉴定潜在CTC中的PD-L1和癌症干细胞标记物。根据Recist标准评估患者的反应。采用单因素方差分析对每个时间点的样本进行统计分析。

研究结果：

　　(1)在第二个时间点检测到的PD-L1+CD45-CTC减少与治疗初始反应最强相关;相反，与疾病稳定(SD)或部分缓解(PR)的患者相比，在疾病进展的患者中发现PD-L1+CD45-细胞数量增加(p = 0.01);

　　(2)CD45-细胞、CD44+CD45-细胞、CD166+CD45-细胞显示出与临床结果无显著相关性;

　　(3)CTC上的基线PD-L1水平与组织上的PD-L1水平无关。

结论：报告了免疫治疗开始前后监测血中CTC表面标志物的可行性和潜在的临床意义, 发现免疫治疗无应答者中PD-L1+CTCs的增加值需进一步验证。

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　　中国CTC产业联盟依托中国临床肿瘤学会、中华医学会检验医学分会、中华医学会病理学分会等国内学术团体，连接相关医疗机构、高校及科研院所、技术企业，更好地开发液体活检技术，更大地推广液体活检市场，更高地推动液体活检的地位，更强地放大液体活检的声音，更快地实现液体活检的临床转化，更精准地为中国老百姓开展肿瘤防治服务。